Phân tách tế bào cumulus của trứng dê bằng sử dụng enzym hyaluronidaza

Tóm tắt

Nghiên cứu này được thực hiện nhằm xác định phương pháp thích hợp trong việc phân tách lớp tế bào cumulus của trứng dê thông qua việc sử dụng enzym hyaluronidaza. Trứng dê được nuôi thành thục trong môi trường TCM-199 đã bổ sung 0,25 mM natri pyruvate, 10% (v/v) fetal bovine serum (FBS), 0,05 μg/m follicle stimulating hormone (FSH), 05 μg/ml luteinizing hormone, 01 μg/ml estradiol, 39^oC, 5% CO₂, khí bão hòa hơi nước trong 32 giờ. Sau đó, trứng thành thục được chuyển sang môi trường TCM-199Hepes với các điều kiện khác nhau về: a) Nồng độ enzym hyaluronidaza (0,2 mg/ml; 0,5 mg/ml; 1 mg/ml; 1,5 mg/ml); b) Nhiệt độ môi trường (32^oC, 37^oC, 40^oC); c) Thời gian xử lý (30 giây, 60 giây, 90 giây, 120 giây, 180 giây). Hiệu quả tách hoàn toàn lớp tế bào cumulus bằng cách kết hợp sử dụng enzym hyaluronidaza và tách cơ học trong các khoảng thời gian 120 giây, 180 giây là thích hợp (85,25% và 86,79%), kết quả này cao hơn rõ rệt (P<0,05) so với tách trong khoảng thời gian 90 giây (43,14%). Kết luận, việc phân tách tế bào cumulus của trứng dê được thực hiện tốt nhất khi sử dụng enzym hyaluronidaza (1,0 mg/ml ; 370C, 120 - 180 giây) kết hợp phương pháp tách cơ học (hút lên xuống bằng pipet thủy tinh có đường kính trong là 130 - 150 μm).