Nghiên cứu kỹ thuật RT-qPCR để định lượng vi khuẩn Gram âm dung nạp mật trong dược phẩm

Tóm tắt

Đặt vấn đề: Theo Dược diển Việt Nam V, chỉ tiêu vi khuẩn Gram âm dung nạp mật là yêu cầu bắt buộc trong kiểm tra giới hạn nhiễm khuẩn của dược phẩm có nguồn gốc từ động thực vật, khoáng chất và thuốc dùng đường hít. Mutiplex RT-qPCR cho phép phát hiện đồng thời các vi khuẩn Gram âm dung nạp mật dựa trên các gen đặc hiệu với độ nhạy và chính xác cao.

Mục tiêu: Áp dụng kỹ thuật RT-qPCR để định lượng vi khuẩn Gram âm dung nạp mật.

Đối tượng và phương pháp nghiên cứu: Các mồi và đoạn dò được thiết kế in silico và kiểm tra in vitro. Phương pháp định lượng tổng số vi khuẩn Gram âm dung nạp mật bằng RT-qPCR được đánh giá các chỉ tiêu thẩm định bao gồm độ đặc hiệu, độ tuyến tính, độ đúng, giới hạn định lượng (LOQ) và giới hạn phát hiện (LOD).

Kết quả: Phương pháp RT-qPCR định lượng tổng số vi khuẩn Gram âm dung nạp mật sử dụng tổ hợp mồi và đoạn dò rplP_F1/R1/P1 và oprI_F1/R1/P1 với nồng độ mồi và đoạn dò lần lượt là 400 và 200 nM đạt yêu cầu về độ đặc hiệu, độ tuyến tính, độ đúng, LOQ là 4.102 tế bào/ml và LOD là 121 tế bào/ml.

Kết luận: Kỹ thuật RT-qPCR có thể áp dụng để định lượng tổng số vi khuẩn Gram âm dung nạp mật trong dược phẩm.

Từ khóa: vi khuẩn Gram âm dung nạp mật; Enterobacteriaceae; Pseudomonas; giới hạn nhiễm khuẩn