TÁCH DÒNG GEN ENDO- β-1,4 GLUCANASE TỪ ASPERGILLUS NIGER VÀ BIỂU HIỆN GEN TRONG SACCHAROMYCES EREVISIAE

Tóm tắt

Endoglucanase là một trong ba dạng của enzyme cellulase và được sử dụng rộng rãi trong nhiều ngành công nghiệp khác nhau, được tổng hợp bởi động vật, thực vật và vi sinh vật.

Β-glucanase là một trong những enzyme làm tăng khả năng tiêu hóa thức ăn của động vật và vì vậy, khi bổ sung enzyme này vào thức ăn nguồn gốc thực vật, ngoài việc làm tăng giá trị dinh dưỡng của chúng mà còn giải quyêt được vấn đề tiêu hóa của gà hoặc lợn do hàm lượng β-glucan cao trong các loại thức ăn này.

Trong bài báo này, gen  β-glucanase từ chủng nấm mốc A.niger đã  được nhân dòng trong vector biểu hiện pESC-His và biểu hiện trong chủng S.cerevisiaeKY117.

Gen EglB trước tiên được tách dòng bằng vector pCR2.1, sau đó sử dụng enzymes giới hạn BamHI và XhoI để gắn gen vào vector biểu hiện pESC-His. Bằng phương pháp dung hợp tế bào trần, plasmid tái tổ hợp pESC-His/EglB đã được biến nạp vào chủng S. cerevisiaeKY117, chủng biến nạp được kiểm tra bằng phương pháp PCR với cặp mồi đặc hiệu của plasmid.

Chủng nấm men tái tổ hợp được nuôi trong môi trường SC-His và  được cảm  ứng bằng galactose. Protein biểu hiện được kiểm tra trên gel SDS-PAGE và kết quả nhận được cho thấy, sau 60 giờ nuôi cấy đã nhận được protein với khối lượng phân tử khoảng 17 kDa, tương ứng với protein của gen EglB theo lí thuyết.

Hoạt tính của protein biểu hiện cũng đã được kiểm tra dựa trên hoạt tính CMC-ase của chủng S. cerevisiae tái tổ hợp. Chủng nấm men không mang plasmid tái tổ hợp không tạo vòng phân giải của CMC trên môi trường thử nghiệm, trong khi đó chủng S. cerevisiaemang plasmid pESC/EglB tạo vòng phân giải rất rõ.